LBEst – Crystal Gryphon, SEC-MALS, Malvern-Zetasizer

Equipamento: Crystal Gryphon

O robô Crystal Gryphon foi configurado para proteínas solúveis e inclui uma cabeça de 96 canais para manipulação de screenings de cristalização em blocos e um dispensador que não tem contato com a solução do poço, que rapidamente aspira e dispensa a solução de proteína, permitindo um rápido fechamento da placa.

Missão: Disponibilizar aos interessados serviço de cristalização de proteínas em larga escala e com consumo de baixos volumes de proteína.

Características: Permite as técnicas de gota sentada, gota suspensa e micro batch Dispenser sem contato com a solução do poço permite a montagem de gotas de até 100nL. Um screening pode ser feito com cerca de 10uL de proteína.

Sistema SEC-MALS Wyatt

O instrumento consiste de um módulo de espalhamento estático de luz a múltiplos ângulos (MALS, Multiple-Angle Light Scattering) miniDAWN® TREOS®, um detector WyattQELS® para medidas de espalhamento dinâmico de luz (DLS, Dynamic Light Scattering) e um detector de índice de refração Optilab® rEX para medidas de concentração das amostras (Wyatt Technology Corporation). Os detectores são montados em linha e acoplados a um equipamento de cromatografia a alta pressão HPLC (Waters), realizando análises de MALS/DLS em tempo real de amostras separadas por cromatografia de exclusão molecular (SEC, Size Exclusion Chromatropraphy, experimento conhecido como SEC-MALS.

Missão: Disponibilizar um equipamento capaz de acessar em tempo real a massa e forma de diferentes populações dentro de uma mesma amostra (separadas durante a cromatografia) para qualquer pesquisador interessado em sistemas heterogêneos ou interações macromoleculares.

Características: Determinação direta e absoluta de peso molecular a partir da detecção simultânea de espalhamento estático de luz em 3 diferentes ângulos. Avaliação do índice de refração da solução (n) e da mudança no índice de refração devido à concentração da amostra (dn/dc) no comprimento de onda onde as medições de LS são feitas. Avaliações simultâneas de coeficientes de difusão a partir de flutuações de intensidade. Software de análises sofisticado, que fornece os desvios-padrão em cada medida. Possibilidade de análises em batch ou célula de fluxo para estudos de pequenas amostras ou populações eluídas provenientes de HPLC acoplado.

Equipamento Malvern Zetasizer µV

O equipamento Malvern Zetasizer µV possui um detector de espalhamento de luz altamente sensível. Ele é adequado para detecção de agregados e avaliação de homogeneidade de soluções proteicas.

Missão: Disponibilizar um equipamento capaz de avaliar a qualidade de amostras proteicas submetidas para ensaios de cristalização através de espalhamento dinâmico de luz (DLS).

Características: Somente 2 µL de amostra são necessários para as análises. Alta sensitividade, equivalente a 0,1 mg/mL de uma proteína com 15 kDa.

Plano de Gestão e Uso:

• O robô Crystal Gryphon está instalado no Laboratório de Biologia Estrutural- LBEst do Grupo de Cristalografia – IFSC Campus 2.

• O sistema SEC-MALS está instalado no laboratório do Grupo de Biofísica “Sérgio Mascarenhas” – IFSC Campus 2.

• Usuários que tenham interesse em utilizar os equipamentos, sejam do IFSC ou de qualquer outra instituição, deverão submeter ao comitê gestor, via e-mail gryphon_mals@ifsc.usp.br, formulário obtido no seguinte link: Formulário Proposta de Uso. Neste formulário deverão ser fornecidas as características das amostras (peso molecular, concentração, pureza, estado de oligomerização, tampão, Gel de SDS da purificação, concentração de sal e outros aditivos etc.) dentro de um plano de trabalho conciso contendo os principais objetivos do projeto. Um equipamento de Dynamic Light Scatering (DLS) está disponível para uma caracterização da amostra. Sugerimos fortemente uma consulta previa para que seja fornecido um auxílio para a sugestão de tampões adequados para a preparação da amostra. O pedido será analisado pelo comitê gestor, que pode negar o acesso caso haja problemas com a amostra da proteína.

• O agendamento será mensal, priorizando-se os Projetos Associados e Complementares desta solicitação.

• As despesas com consumíveis serão custeadas pelo usuário, o custo aproximado é de US$ 20,00 por placa de 96 poços, para utilização do robô Crystal Gryphon.

• A eventual cobrança de taxas de serviços será feita através de uma das fundações associadas a USP São Carlos, sendo que taxas diferenciadas para as solicitações provenientes de fora da Área acadêmica e externos ao IFSC/USP podem ser aplicadas.

Referências

Os trabalhos a serem publicados, bem como teses, dissertações e monografias deverão mencionar o uso do Equipamento Multi-Usuário (EMU/FAPESP) / LBEst / Grupo de Cristalografia / IFSC.